對于液相色譜工作者來說,想要保證液相色譜實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行,除了確保手上有一支合適的色譜柱之外,選擇和配置好實(shí)驗(yàn)流動相也是成敗的關(guān)鍵因素。通常,用于反相 LC 的流動相可以是純?nèi)軇⒒旌先軇┗蚝芯彌_液和添加劑的溶劑。而實(shí)際的流動相配置中有數(shù)百種溶劑可供選擇,因此配置出符合需求的流動相變得具有挑戰(zhàn)性。本期,我們將從流動相的溶劑特性、緩沖液和添加劑選擇以及色譜技術(shù)對流動相的需求趨勢展開介紹。
流動相溶劑特性
流動相的一些特性可以幫助我們?yōu)榉聪喾治鲞x擇正確的流動相組成。這些特性包括:
溶劑純度——在 LC 中選擇作為流動相的溶劑應(yīng)為 色譜純度或質(zhì)譜級純度,應(yīng)進(jìn)行過濾和超聲處理,以確保 UV 光譜中的吸光度最小且不含氣泡。
溶劑粘度——反相流動相應(yīng)為最佳粘度,以幫助確保通過HPLC 柱固定相的最佳線速度,從而提供更窄和更尖銳的峰,因而提高分析的整體靈敏度。
折光率——這是使用示差折光檢測器時的一個關(guān)鍵考慮因素。理想情況下,當(dāng)使用示差檢測器時,流動相和樣品溶劑應(yīng)具有相似的折射率以避免出現(xiàn)負(fù)峰,換句話說,樣品應(yīng)在流動相中制備。
溶劑沸點(diǎn)——最好選擇沸點(diǎn)低的溶劑以提高回收率,特別是在LC-MS 中,揮發(fā)性更強(qiáng)的溶劑將改善離子化,從而提高M(jìn)S 靈敏度。
無腐蝕性——流動相溶劑不得腐蝕流路中的 HPLC 管、泵閥、密封件和其他部件。
溶劑毒性——確保溶劑無毒并且應(yīng)使用穩(wěn)定狀態(tài)下的溶劑。
溶劑混溶性——選擇與樣品混溶的溶劑。分析物也必須可溶。否則,在色譜柱入口篩板處將產(chǎn)生樣品沉淀,從而引發(fā)高背壓、基線問題、導(dǎo)致分析物峰靈敏度較低以及色譜圖中峰面積和峰形問題。
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